Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型号糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到家兔自身特异性到注意到1DF白血病外科征状的的发展所部在成人时期就有不太好的揭示，多个家兔自身特异性构造性的成人里有70%在血清转换后10天内患病白血病，而随访15年的成人这一人口比例上升到84%。相对于之下，占外科1DF白血病一半以上的DF1DF白血病的发病机制还未给与确实的研究者。

越来越多的人开始适用分期控制系统来定义1DF白血病的的发展：群体在注意到多种家兔自身特异性时重回第1阶段，注意到血糖总括度时重回第2阶段，注意到征状时重回第3阶段。一些多发家兔自身特异性构造性的群体，在1期和2期，的发展较迟，并发展为发病的1DF白血病。我们前揭示了一第三组在首次扫描到多种家兔自身特异性采样后至更少10年无白血病的总括迟的发展者，这第三组病征人数更少，但构造极为明确。随后，我们推测家兔自身蛋白质特异性CD8+T细胞膜反应在的发展缓迟的病征里前提不长期存在，但在近期发病和长期长期存在的白血病病征里很容易扫描到。这也许暗示，与的发展病征相对于，这些病征致病反应的调节大幅提高。

早期研究者暗示，尽管调节性T细胞膜(Treg)需求量正常，但白血病病征长期存在一些功用缺陷，其里除此以外对IL-2的反应技能提高。此外，白血病病征里的物理现象CD4+T细胞膜也许对调节更具抵抗性，观感为物理现象T细胞膜的依赖性大幅提高，自然造成的Treg和体外造成的其会Treg，以及蛋白质亲身经历的CD4+T细胞膜里IL-2反应大幅提高。本研究者的目的是揭示了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在一小群总括缓迟的发展者里的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以群体为基础的纵向研究者，在21岁下述确诊的病征亲属里检查1DF白血病的危险环境因素。我们前揭示了长期缓迟的发展者的构造，他们保持多重家兔自身特异性构造性有约10年，但未注意到白血病的外科征状，迟性或非顺利进行性致病。随后，10名再次保持无白血病并愿意提供大量血液采样的缓迟的发展者纳入T和B细胞膜功用深入研究者。在目前的研究者里，8名迟的发展者(SP第三组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身特异性构造性。所有的发起者都处于1DF白血病的发展的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身特异性对某些蛋白质的橘红色，然而，一名病征已经处于2期至更少6年，但未注意到外科征状，一名病征被诊断为白血病，该受测者72岁，在采集试验中采样时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在科研人员里对该ADP顺利进行了单独检验。裂解外周血单个氘细胞膜(PBMCs)，改用多参数流式细胞膜法术和T细胞膜依赖性测试检验ADP里Treg的基频、表DF和功用。适用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和回归)顺利进行无监督聚类深入研究者，检验Treg表DF。

结果：与肥胖症ADP相对于，来自迟的发展体的知觉CD4+T细胞膜的监督聚类推断，触发的知觉CD4+ Treg基频上升，与糖皮质激素其会的TNFR相关蛋白(GITR)表述上升有关。一名HbA1c下降时的病征与的发展缓迟者和比如说的对照第三组相对于，Treg五音相同。功用相极为，与肥胖症ADP相对于，来自缓迟的发展体的Treg介导的CD4+物理现象T细胞膜依赖性明显受损。观感为对物理现象CD4+T细胞膜CD25和CD134表述的依赖性上升。

示意图1 透彻的表DF深入研究者推断，CD4+Treg亚DF在迟的发展队列里上升。由FlowSOM生成的Treg会议室，涌进在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标识物表述深入研究出10个元簇:知觉T细胞膜_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞膜;HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)适用9个不同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个节点代表一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在节点第三组周围上色。每个节点里的饼示意图透露单个标识的表述级别。(b)每个元聚类的热示意图，以推断整体标识表述。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)生成示意图，以及FlowSOM比对的每个元簇的孔洞。(e-l)相极为丰度为每个metacluster木箱本站示意图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP第三组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞膜(l)。紫色带三子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 适用CITRUS的预测模DF证实，Treg基频的上升是的发展缓迟的标志。PG门控(a - f)和柑橘深入研究者(g-k)极为SP发起者和比如说的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的别具特色示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述顺利进行裂解，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(布氏)第三组以及ADPSP 606(紫色)里CD25+ cd127的基频核心内容示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控邻域的木箱本站示意图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头厚实的簇被比对为SP和HD队列之间的不同。(j)木箱本站示意图推断了在SP(布氏)和HD(灰点)第三组里，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的相极为丰度(人口比例)。(k)直方示意图推断每个簇的表DF(暗红色)和Treg标识相极为表述与背景表述(浅蓝色);上列，存储器Treg_3;一个大一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇里标识的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩检验

示意图3 与肥胖症献血者相对于，的发展缓迟者知觉treg的GITR上升。每个知觉CD4+T细胞膜元簇(知觉T细胞膜_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞膜;HLA-DR + GITR +知觉T细胞膜;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表述标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热示意图(sp606不除此以外在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇里所有HD(棕色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表述串联，推断直方示意图(c)和核心内容示意图(d)。Wilcoxon配对大写秩和检验，p< 0.07(紫色)所有ADP除此以外，p< 0.05(浅蓝色)ADPSP 606和比如说的HD不除此以外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表述，从PG门控，从所有HD(棕色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(紫色)串联，推断直方示意图(e)和核心内容示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写秩检验

示意图4 来自缓迟的发展的CD4+ treg细胞膜操纵物理现象CD4+T细胞膜的技能提高。SP第三组用浅蓝色的本站和带三子透露，HD第三组用黑色的本站和带三子透露，紫色的本站/带三子透露ADPsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标识为CFSE, Treg按捕捉到的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠转化细胞膜，培育3紧接著顺利进行流式细胞膜法术扫描。(a-d)与CD4+需要的话者相极为应的treg培育(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培育。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE依赖性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百分比。适用构造性对照(触发的鼓动细胞膜分别为treg)计算依赖性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究者。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重极为测试

示意图5 物理现象CD4+T细胞膜对缓迟的发展的T细胞膜转化的依赖性更敏感。SP第三组用浅蓝色的本站和带三子透露，HD第三组用黑色的本站和带三子透露，紫色的本站/带三子透露ADPsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标识，treg按捕捉到的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠转化细胞膜，培育3紧接著顺利进行流式细胞膜法术(CD25反染)和细胞膜因三子深入研究者。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培育。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE依赖性百分比(b)。(c,d) CD25依赖性百分比(c)和CD134依赖性百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育里的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究者。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重极为测试

论断：我们得出的论断是，来自缓迟的发展三子的转化知觉CD4+Treg在GITR表述里给与了扩充和丰富，强调了实质性研究者Treg在1DF白血病也许会群体里的异质性的合理性。

出处应是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28