Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者重大突破缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来去甲自身肠道到显现出来1同型肾病临床病因的令人满意率在成年人时期就有很好的刻画，多个去甲自身肠道乙型肝炎的成年人中会有70%在肠道转换后10年内患上肾病，而随访15年的成年人这一数量增大到84%。相较较，占有临床1同型肾病一半以上的同型1同型肾病的肺癌机制还无法取得充分的学术研究。

越来越多的人开始用到已确切的系统来定义1同型肾病的令人满意：有机体在显现出来多种去甲自身肠道时转至第1过渡阶段，显现出来低血糖异常时转至第2过渡阶段，显现出来病因时转至第3过渡阶段。一些多发去甲自身肠道乙型肝炎的有机体，在1期和2期，令人满意很慢，并发展为肺癌的1同型肾病。我们以后刻画了一四组在首次侦测到多种去甲自身肠道取样后至不算10年无肾病的正因如此慢令人满意者，这四组病患者人数不算，但基本特征非常明确。随后，我们找到去甲自身蛋白特异性CD8+T细胞膜加成在令人满意加速的病患者中会基本不不存在，但在近期肺癌和近十年不存在的肾病病患者中会很容易侦测到。这也许暗示，与令人满意病患者相较，这些病患者性疾病加成的调控进一步提高。

现代学术研究暗示，尽管调控性T细胞膜(Treg)数量长时间，但肾病病患者不存在一些功能缺陷，其中会还包括对IL-2的加成能力也增大。此外，肾病病患者中会的畸变CD4+T细胞膜也许对调控更具抵抗性，展示出为畸变T细胞膜的选择性弱化，自然地激发的Treg和体外激发的抑止Treg，以及蛋白亲身经历的CD4+T细胞膜中会IL-2加成弱化。本学术研究的用意是刻画了CD4+调控性T细胞膜(Treg)在一小群正因如此加速令人满意者中会的基本特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以人群为基础的纵向学术研究，在21岁以下复发的病患者亲属中会体检1同型肾病的危险因素。我们以后刻画了近十年加速令人满意者的基本特征，他们保持稳定多重去甲自身肠道乙型肝炎最少10年，但无法显现出来肾病的临床病因，慢性或非开展性性疾病。随后，10名继续保持稳定无肾病并不愿包括大量肠道取样的加速令人满意者纳入T和B细胞膜功能的系统地学术研究。在目前的学术研究中会，8名慢令人满意者(SP四组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身肠道乙型肝炎。所有的参与者都所处1同型肾病令人满意的1期，尽管一些人随后得不到了去甲自身肠道对某些蛋白的乙型肝炎加成，然而，一名病患者早已所处2期至不算6年，但无法显现出来临床病因，一名病患者被诊疗为肾病，该病患者72岁，在搜集实验取样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据的系统地学术研究中会对该NADP开展了分开分析。转化外周血单个核能细胞膜(PBMCs)，引入多给定流式细胞膜绝技和T细胞膜选择性试验分析NADP中会Treg的频率、表同型和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类断定、相关联和回归)开展无监督聚类的系统地学术研究，分析Treg表同型。

结果：与卫生NADP相较，来自慢令人满意体的心灵CD4+T细胞膜的监督聚类结果显示，激来生的心灵CD4+ Treg频率增大，与糖皮质激素抑止的TNFR相关蛋白(GITR)隐含增大有关。一名HbA1c升温的病患者与令人满意加速者和反之亦然的依此四组相较，Treg谱有所不尽相同。功能的系统地学术研究暗示，与卫生NADP相较，来自加速令人满意体的Treg介导的CD4+畸变T细胞膜选择性明显毁损。展示出为对畸变CD4+T细胞膜CD25和CD134隐含的选择性增大。

上图1 的系统地的表同型的系统地学术研究结果显示，CD4+Treg亚同型在慢令人满意队列中会增大。由FlowSOM分解的Treg四楼，挤满在来自所有NADP的来生CD4+CD45RA -细胞膜上。根据上面物隐含断定出10个元簇:心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;线或程Treg_1;线或程Treg_2;线或程Treg_3;和线或程Treg_4。(a)用到9个不尽相同Treg上面分解的10个元簇的MST。每个结点都有一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在结点四组一处上色。每个结点中会的煎饼上图坚称单个上面的隐含级别。(b)每个元聚类的热上图，以结果显示整体上面隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解上图，以及FlowSOM比对的每个元簇的沙质。(e-l)相非常同位素为每个metacluster盒线或上图(同位素> 0.05%)确切为HD和SP四组:线或程Treg_2 (e),线或程Treg_3 (f),线或程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞膜(l)。绿色左上方都有理应当SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 用到CITRUS的预测模同型证实，Treg频率的增大是令人满意加速的标志。分级除此以外(a - f)和水果的系统地学术研究(g-k)非常SP参与者和反之亦然的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的标志性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR隐含开展转化，模拟器FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(杂色)四组以及NADPSP 606(绿色)中会CD25+ cd127的频率汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外闭包的盒线或上图;(c) HLA-DRloGITR−(线或程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线或程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线或程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线或程T cell)。(g - i)柑桔簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，对角突出的簇被比对为SP和HD队列之间的不尽相同。(j)盒线或上图结果显示了在SP(杂色)和HD(灰点)四组中会，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相非常同位素(数量)。(k)直方上图结果显示每个簇的表同型(粉色)和Treg上面相非常隐含与背景隐含(深蓝色);上列，线或程Treg_3;下面一行，线或程Treg_4。背景与所有其他簇中会上面的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推符号秩检验

上图3 与卫生献血者相较，令人满意加速者心灵treg的GITR增大。每个心灵CD4+T细胞膜元簇(心灵T细胞膜_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞膜;HLA-DR + GITR +心灵T细胞膜;线或程Treg_2;线或程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个隐含上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的隐含热上图(sp606不还包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中会所有HD(紫色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR隐含结合，结果显示直方上图(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon类推符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NADP还包括，p< 0.05(深蓝色)NADPSP 606和反之亦然的HD不还包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR隐含，从分级除此以外，从所有HD(紫色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(绿色)结合，结果显示直方上图(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推符号秩检验

上图4 来自加速令人满意的CD4+ treg细胞膜支配畸变CD4+T细胞膜的能力也增大。SP四组用深蓝色的线或和左上方坚称，HD四组用黑色的线或和左上方坚称，绿色的线或/左上方坚称NADPsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜开展分选。CD4+CD25−(转发者)被上面为CFSE, Treg按掩蔽的数量试样。用抗CD3 /28微珠来生化细胞膜，培养3翌日开展流式细胞膜绝技侦测。(a-d)与CD4+转发者相非常应当的treg培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培养。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE选择性数量(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性数量。用到乙型肝炎依此(激来生的鼓动细胞膜不含treg)计算选择性数量。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差的系统地学术研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

上图5 畸变CD4+T细胞膜对加速令人满意的T细胞膜来生化的选择性更敏感。SP四组用深蓝色的线或和左上方坚称，HD四组用黑色的线或和左上方坚称，绿色的线或/左上方坚称NADPsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜开展分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上面，treg按掩蔽的数量试样。用抗CD3 /28微珠来生化细胞膜，培养3翌日开展流式细胞膜绝技(CD25反染)和细胞膜因子的系统地学术研究。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培养。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE选择性三份(b)。(c,d) CD25选择性三份(c)和CD134选择性三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在粗略估计中会的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差的系统地学术研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

事实：我们得出的事实是，来自加速令人满意子的来生化心灵CD4+Treg在GITR隐含中会取得了扩展和充沛，强调了进一步学术研究Treg在1同型肾病高风险有机体中会的异质性的全面性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28